1、 夾心法按操作步驟可分為一步法、兩步法和三步法。三種方法之間的差異總結(jié)如下：
 
2、 ELISA競(jìng)爭(zhēng)法與夾心法的區(qū)別：
競(jìng)爭(zhēng)性ELISA：
由于缺少兩個(gè)以上可用于夾心法的位點(diǎn)，小分子抗原或半抗體不能用雙抗體夾心法測(cè)量，可以使用競(jìng)爭(zhēng)法。原理是樣品中的抗原與一定量的酶標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)，并與固體抗體結(jié)合。樣品中抗原含量越多，與固相結(jié)合的酶標(biāo)記抗原越少，顏色越淺。
優(yōu)點(diǎn)：適用于小分子抗原，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性高。
缺點(diǎn)：總體敏感性和特異性較差。
夾心ELISA：
檢測(cè)到的抗原被包裹在兩種抗體之間，其中一種抗體將抗原固定在固相載體上，即捕獲抗體。另一種是檢測(cè)抗體，酶標(biāo)記后可直接用于測(cè)定抗原的量；或者在沒有標(biāo)記的情況下，通過酶標(biāo)記的兩種抗體來測(cè)量抗原的量。必須仔細(xì)選擇這兩種抗體，以避免交叉反應(yīng)或競(jìng)爭(zhēng)同一抗原結(jié)合位點(diǎn)。
優(yōu)點(diǎn)：高度敏感和特異性，抗原不需要預(yù)先純化。
缺點(diǎn)：抗原必須具有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合位點(diǎn)。
競(jìng)爭(zhēng)法和夾心法有相同點(diǎn)：兩種方法都用于檢測(cè)抗原物質(zhì)。
差異：競(jìng)爭(zhēng)法用于檢測(cè)小分子抗原物質(zhì)。只有一個(gè)反應(yīng)位點(diǎn)，不能用夾心法檢測(cè)。大分子抗原更適合夾心法（也可以使用競(jìng)爭(zhēng)法），因?yàn)閵A心法具有更好的特異性和敏感性。
 
注：不同物質(zhì)的適用原則可能不同，因此并不是說競(jìng)爭(zhēng)法的結(jié)果必然優(yōu)于三明治法，三明治法的結(jié)果也不一定優(yōu)于競(jìng)爭(zhēng)法。我會(huì)根據(jù)不同的項(xiàng)目推薦不同的方法。
 
3： 即用標(biāo)準(zhǔn)（稀釋液體標(biāo)準(zhǔn)）和高濃度單試劑標(biāo)準(zhǔn)（粉末標(biāo)準(zhǔn)）的優(yōu)缺點(diǎn)
隨時(shí)可用：
優(yōu)點(diǎn)：使用更方便。無需額外稀釋，即可拆卸立即使用。線性度會(huì)更好
缺點(diǎn)：儲(chǔ)存時(shí)間相對(duì)較短，穩(wěn)定性容易受到儲(chǔ)存條件和時(shí)間的影響
粉末標(biāo)準(zhǔn)：
優(yōu)點(diǎn)：儲(chǔ)存時(shí)間更長(zhǎng)，試劑穩(wěn)定性更好，可根據(jù)需要配置所需的標(biāo)準(zhǔn)濃度
缺點(diǎn)：你需要自己稀釋線性濃度。操作麻煩，稀釋線性容易出現(xiàn)問題