免疫染色包括免疫熒光（IF）、免疫組織化學（IHC）、免疫細胞化學（ICC）等。您可以參考以下步驟進行操作。
樣品制備
對于粘附細胞：
可以使用多孔板（例如6孔板、24孔板）直接培養細胞，然后在預定時間固定以進行后續操作。
你也可以使用一個干凈的蓋玻片，將其浸泡在70%的乙醇中，用無菌鑷子將其放置在6孔板中，然后用無菌鹽水、PBS或培養液沖洗掉剩余的乙醇。此時，可以種植細胞進行培養。在細胞附著在蓋玻片上并生長良好后，可以進行后續操作，如固定。
對于懸浮細胞：
細胞首先固定在固定溶液中，然后滴到載玻片上。干燥后，細胞緊緊地粘附在載玻片上。然后可以繼續進行后續操作。如果細胞的粘附能力較差，則可以在載玻片上處理諸如PDL之類的物質以增強載玻片的粘附能力。
對于冷凍切片：
在將切片放置在載玻片上之后，可以直接執行諸如固定之類的后續操作。
對于石蠟切片：
脫蠟：切片在二甲苯中脫蠟5分鐘，然后用新鮮的二甲苯代替進行脫蠟。二甲苯共用于脫蠟3次。無水乙醇5分鐘，兩次。90%乙醇5分鐘，兩次，70%乙醇5分鐘一次。蒸餾水5分鐘，兩次。
抗原修復：根據不同的抗原和抗體，您可以選擇將切片放置在以下抗原修復溶液中：10mM檸檬酸鈉，pH6.0，或1mM EDTA，pH8.0，或10mM Tris，pH10.0，在95℃下加熱12分鐘，并在約30分鐘內緩慢冷卻至室溫。
固定的
細胞或切片可以使用適當的固定溶液固定，例如BIOLEBO（YT086）的免疫染色固定溶液。固定后，可以使用免疫染色洗滌劑（YT089）清洗兩次，每次5分鐘。
關
加入免疫染色封閉溶液（YT087）并封閉60分鐘。如果背景較高，可以在4℃下密封過夜。
在從密封開始的所有步驟中，重要的是要注意樣品的水分含量，避免干燥，否則極易產生高背景。
在整個免疫染色過程中，我們建議使用側擺振動器。側擺速度相對較慢，也很容易讓溶液覆蓋樣本。如果樣品相對容易脫落，也可以將所有步驟放在桌面上進行靜態操作，即密封、抗體孵育、洗滌和其他步驟而不搖晃，但建議在靜態操作期間適當延長動作時間或次數。
*抗體孵育
參照*抗體說明書，用免疫染色*抗體稀釋劑（YT088）按適當比例稀釋*抗體。
用微型臺式真空泵吸走密封液，立即加入稀釋后的*抗體，在室溫或4℃下，在側擺搖壺上緩慢搖一搖，孵育一小時。如果*抗體孵育一小時的效果不理想，可以在4℃下慢慢搖晃，孵育過夜。
回收*個抗體。加入免疫染色洗滌劑，在側搖臺上緩慢搖晃5分鐘。吸收所有洗滌液后，加入洗滌液并洗滌5分鐘。總共清洗3次。如果結果背景較高，則可以適當延長洗滌時間并增加洗滌次數。
二次抗體孵育
參照第二抗體的說明書，用免疫熒光染色第二抗體稀釋劑（YT090）以適當比例稀釋熒光標記的第二抗體，或用免疫熒光著色（非熒光）第二抗體稀釋液（YT091）稀釋辣根過氧化物酶（HRP）、生物素或堿性磷酸酶（AP）標記的第三抗體。
用微型臺式真空泵吸出洗滌液，立即加入稀釋后的第二抗體，在室溫或4℃下，在側擺搖床上緩慢搖動，孵育1小時。
回收第二種抗體。加入免疫染色洗滌劑，在側搖臺上緩慢搖晃5分鐘。吸收所有洗滌液后，加入洗滌液并洗滌5分鐘。總共清洗3次。如果結果的背景較高，則建議適當延長洗滌時間并增加洗滌次數。